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上海远慕生物科技有限公司
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质粒提取实验常见问题分析
人阅读 发布时间:2024-03-08 10:28
质粒提取常见问题分析
1、影响质粒提取的因素有哪些?
质粒提取的得率和质量与很多因素有关,如宿主菌的种类和培养条件、细菌细胞的裂解、质粒拷贝数、质粒的稳定性、抗生素、吸附膜的吸附能力、提取操作的熟练程度等等。
2、为什么从革兰氏阳性菌中提取质粒要在悬浮液中加入溶菌酶?
革兰氏阳性菌有一层细胞壁,必须加入溶菌酶才能使之溶解。
3、如何根据实验需要选择不同级别的产品?
从纯度上:各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、文库筛选、连接和转化,普通纯度的质粒可以满足要求;而对于转染实验,则要求使用高纯度质粒提取试剂盒方能满足要求。
从提取的量上:1-20μg,应选择小量提取试剂盒;20-40μg,应选择中量提取试剂盒;大于40μg,应选择大量提取试剂盒。
从宿主菌上:分为普通细菌质粒提取试剂盒、G+菌质粒提取试剂盒和酵母菌质粒提取试剂盒,根据情况进行选择。
1、影响质粒提取的因素有哪些?
质粒提取的得率和质量与很多因素有关,如宿主菌的种类和培养条件、细菌细胞的裂解、质粒拷贝数、质粒的稳定性、抗生素、吸附膜的吸附能力、提取操作的熟练程度等等。
2、为什么从革兰氏阳性菌中提取质粒要在悬浮液中加入溶菌酶?
革兰氏阳性菌有一层细胞壁,必须加入溶菌酶才能使之溶解。
3、如何根据实验需要选择不同级别的产品?
从纯度上:各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、文库筛选、连接和转化,普通纯度的质粒可以满足要求;而对于转染实验,则要求使用高纯度质粒提取试剂盒方能满足要求。
从提取的量上:1-20μg,应选择小量提取试剂盒;20-40μg,应选择中量提取试剂盒;大于40μg,应选择大量提取试剂盒。
从宿主菌上:分为普通细菌质粒提取试剂盒、G+菌质粒提取试剂盒和酵母菌质粒提取试剂盒,根据情况进行选择。