培养基制备规程

1.目的
规范本中心微生物实验室培养基制备工作，保证培养基的质量。

2.适用范围
本规程适用于使用商品化干粉培养基制备各种待用培养基。

3.职责
3.1 培养基制备人员负责按本规程制备各类培养基，及时填写成品培养基制备记录，编制培养基目录，粘贴标签。
3.2 科室负责人：负责指导、监督检验人员按规程制备培养基。

4.制备程序

4.1 概述
4.1.1 制备培养基所用的化学药品，均为化学纯。有些试剂在使用前应先试用。
4.1.2 使用脱水培养基和其他含有有害物质（如胆盐或其他选择剂）的成分时，应遵循良好实验室规范和生产厂商提供的使用说明。
4.1.3 使用商品化脱水合成培养基制备培养基时，应严格按照厂商提供的使用说明配制。如质量/体积、PH、制备条件、灭菌条件和操作步骤等。
4.1.4 使用各别成分制备培养基时，应按配方准确配制，并记录所使用成分的特性。
4.1.5 制备培养基常用的容器为玻璃、不锈钢铝、锅或搪瓷容器。不宜使用铜或铁锅。培养基中的含铜量过高时（＞0.3mg/1000ml），细菌不易生长；含铁量过高时（＞0.14mg/1000ml），则妨碍细菌毒素的产生。

4.2 水
4.2.1 制备培养基应使用蒸馏水或相同质量的水，以排除测试条件下抑制或影响微生物生长的物质。电阻率在25℃时应≥300000Ω·cm。最好每周检测一次。
4.2.2 制备培养基时避免采用离子交换器生产的去离子水，其微生物含量可能较高，这种水在过滤灭菌后仍可能带有细菌生长的抑制因子。

4.3 称量和复水
4.3.1 称量所需量的脱水培养基（注意缓慢操作，必要时佩戴口罩或在通风柜中操作，以防吸入含有有毒物质的培养基粉末），先加入少量的水，充分混合（注意避免培养基结块），然后再加水至所需的量。
4.3.2 必须选择合适的天平和量筒，以确保称量和移液的准确性。

4.4 溶解和分装
脱水培养基加水后应适当加热，并不停搅拌使其快速溶解，必要时，重新溶解。含琼脂的培养基在加热前应先浸泡几分钟。用各别成分制备的培养基应将不同成分分别加入适量的水中，并充分溶解，然后再加水至所需的量。

4.5  测定和调整PH
4.5.1 用PH计或精密PH纸测pH，必要时进行调整。
4.5.2 在实验室用各别成分制备的培养基，除特殊说明外，培养基灭菌后冷却至25℃时，PH的变化不应超过0.2个单位。
4.5.3 一般使用浓度约为40g/L(约1mol/L)的氢氧化/钠溶液或浓度约为36.5g/L(约1mol/L)的盐酸溶液调整培养基的pH。

4.6 分装
将配制好的培养基根据使用要求分装到适当的容器中，并及时密封好。

4.7 灭菌
4.7.1分装好的培养基应当天进行灭菌处理（2小时内灭菌最佳）。
4.7.2实验室采用湿热灭菌对培养基进行灭菌处理，按照培养基使用说明采用合适的灭菌温度和时间。

4.8 保存
制就的培养基不宜保存过长，以少量勤做为宜。培养基存放于暗处和（或）4℃～12℃冰箱的密封袋或平皿筒中可延长贮存期限。

4.9 制备记录
培养基制备完毕后，应及时填写“成品培养基制备记录”和“成品培养基目录清单”，并在外包装上贴好相应的标签，标明名称，编号，制备日期和有效期等内容。