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如何确定一抗的稀释比例?

人阅读 发布时间:2023-01-11 10:13

如果说明书中有推荐的稀释比例,请按照该稀释比例进行实验。但是由于标本类型、实验条件、操作环境等各种因素的影响,推荐浓度仅作为参考。实验者需要在推荐浓度周围进行多个浓度梯度的实验,从中发现最佳的稀释比例。

如果说明书没有推荐稀释比例,仅注明“Use at an assay dependent dilution”,就需要做大量的预实验来摸索最佳的比例了。下表列出的纯化抗体抗体用于不同实验方法时常用的工作浓度,可以作为预实验的参考。未纯化的抗体一般在说明书中不会标明抗体的浓度,因为大部分全抗血清、培养上清或腹水形式的产品浓度都是没有经过测定的。如果未纯化抗体产品的说明书中没有标明其中特异性抗体的浓度,实验者可以参考下表中“估计浓度”确定各种实验稀释比例。

请记住,下表中的各种稀释比例和工作浓度仅仅是作为一个起始点,需要根据试验结果来进行适当的调整。最好以此起点作一系列的浓度,从中确定最佳的工作浓度和稀释比例!

 

组织培养上清

腹水

全抗血清

纯化抗体

WB / dot blot

1/100

1/1000

1/500

1 ug/ml

IHC / ICC

neat - 1/10

1/100

1/50 - 1/100

5 ug/ml

EIA / ELISA

1/1000

1/10000

1/5000

0.1 ug/ml

FC

1/100

1/1000

1/500

1 ug/ml

IP

 

1/100

1/50-1/100

1 - 10 ug/ml

Concentration estimate

1 - 3 mg/ml

5 - 10 mg/ml

1 - 10 mg/ml

 

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