上海远慕生物科技有限公司
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如何确定一抗的稀释比例?
人阅读 发布时间:2023-01-11 10:13
如果说明书中有推荐的稀释比例,请按照该稀释比例进行实验。但是由于标本类型、实验条件、操作环境等各种因素的影响,推荐浓度仅作为参考。实验者需要在推荐浓度周围进行多个浓度梯度的实验,从中发现最佳的稀释比例。
如果说明书没有推荐稀释比例,仅注明“Use at an assay dependent dilution”,就需要做大量的预实验来摸索最佳的比例了。下表列出的纯化抗体抗体用于不同实验方法时常用的工作浓度,可以作为预实验的参考。未纯化的抗体一般在说明书中不会标明抗体的浓度,因为大部分全抗血清、培养上清或腹水形式的产品浓度都是没有经过测定的。如果未纯化抗体产品的说明书中没有标明其中特异性抗体的浓度,实验者可以参考下表中“估计浓度”确定各种实验稀释比例。
请记住,下表中的各种稀释比例和工作浓度仅仅是作为一个起始点,需要根据试验结果来进行适当的调整。最好以此起点作一系列的浓度,从中确定最佳的工作浓度和稀释比例!
组织培养上清 |
腹水 |
全抗血清 |
纯化抗体 |
|
WB / dot blot |
1/100 |
1/1000 |
1/500 |
1 ug/ml |
IHC / ICC |
neat - 1/10 |
1/100 |
1/50 - 1/100 |
5 ug/ml |
EIA / ELISA |
1/1000 |
1/10000 |
1/5000 |
0.1 ug/ml |
FC |
1/100 |
1/1000 |
1/500 |
1 ug/ml |
IP |
1/100 |
1/50-1/100 |
1 - 10 ug/ml |
|
Concentration estimate |
1 - 3 mg/ml |
5 - 10 mg/ml |
1 - 10 mg/ml |