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远慕生物介绍动物基因组DNA提取方法及步骤

人阅读 发布时间:2019-10-08 12:00

     基因组DNA提取是最常见分子生物学实验之一。今天给大家介绍的是动物基因组DNA提取。DNA是遗传信息的载体,是最重要的生物信息分子,是分子生物学研究的主要对象,为了进行测序、杂交、基因表达、文库构建等实验,获得高分子量和高纯度的基因组DNA是非常重要的前提,因此基因组DNA的提取也是分子生物学试验技术中最重要、最基本的操作之一。

动物基因组DNA提取实验步骤:

1、取新鲜或冰冻动物组织块0.1g(0.5cm3),尽量剪碎。置于玻璃匀浆器中,加入1ml的细胞裂解缓冲液匀浆至不见组织块,转入1.5ml 离心管中,加入蛋白酶K (500ug/ml)20μl,混匀。在65℃恒温水浴锅中水浴30min,也可转入37℃水浴12~24h,间歇振荡离心管数次。于台式离心机以12000 rpm离心5min,取上清液入另一离心管中。

2、加2倍体积异bing醇,倒转混匀后,可以看见丝状物,用100ul 吸头挑出,凉干,用200ul TE 重新溶解。(可进行PCR反应等,需要进一步纯化的按下列步骤进行)

3、加等量的酚:氯fang:异wu醇振荡混匀,离心12000 rpm,5min。

4、取上层溶液至另一管,加入等体积的氯fan?异wu醇,振荡混匀,离心12000 rpm,5min。

5、取上层溶液至另一管,加入1/2体积的7.5mol/L乙酸氨加入2倍体积的无水乙醇,混匀后室温沉淀2min ,离心12000 rpm ,10min。

6、小心倒掉上清液,将离心管倒置于吸水纸上,将附于管壁的残余液滴除掉。

7、用1ml 70%乙醇洗涤沉淀物1次,离心12000 rpm , 5min。

8、小心倒掉上清液,将离心管倒置于吸水纸上,将附于管壁的残余液滴除掉,室温干燥。

9、加200ul TE重新溶解沉淀物,然后置于4℃或?C20℃保存备用。

10、吸取适量样品于GeneQuant上检测浓度和纯度。

在动物基因组DNA提取试验中要特别注意以下几点:

1、尽量简化操作步骤,缩短提取过程。

2、减少化学因素对核酸的降解。

3、减少物理因素对核酸的降解:机械剪切力和高温。

4、防止核酸的生物降解:排除核酸酶。 想要查看动物基因组DNA提取更详细信息,请点击查看远慕生物实验库: 动物基因组DNA提取 。全面介绍了本实验原理、操作步骤、注意事项等。提供全部本实验生化试剂、耗材、仪器。欢迎选购。

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