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细胞转染时效率的检测方法有哪些?

人阅读 发布时间:2019-06-17 10:26

经过一大波的实验折腾,细胞稳转大作战告捷,下一步就开始做检测了。稳转株的检测方法,我们积累如下4种:

一、实时定量
PCR检测

实时荧光定量PCR Quantitative Real-time PCR)是一种在DNA扩增反应中,以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。Real-time PCR是在PCR扩增过程中,通过荧光信号,对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期,模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系,所以成为定量的依据。但是,荧光定量PCR所检测的是转染后细胞中待测基因的mRNA的表达水平,对于目的基因的蛋白表达水平不能够检测;

二、Wester Blot检测
Western Blot又称蛋白质免疫印迹(免疫印迹实验),其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或者生物组织样品进行着色,并通过分析着色的位置和着色的深度获得特定蛋白在所分析的细胞或者组织中表达情况的信息。Western Blot所检测的是组织或者细胞中蛋白质的表达水平。

三、流式细胞术
流式细胞术(Flow CytometryFCM)是一种在功能水平上对细胞或者其他生物粒子进行定量检测和分析的检测手段,它可以高速分析上万个细胞,并能同时从一个细胞中检测得到多个参数,与传统检测方法相比具有更加快速、准确以及定量等特点。使用流式细胞术检测转染效率可以更加的确定转染的效率,对转染效率进行量化。

四、荧光显微镜观察
当我们转染的质粒DNA含有荧光蛋白基因是,可以通过荧光显微镜观察的方法来确定转染的效率,在荧光显微镜下,可以观察到荧光的强弱以及荧光的效率。

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