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外泌体提取鉴别与功能性实验,

人阅读 发布时间:2019-04-09 16:30

      Exosome (外泌体)是活细胞分泌的直径约为 30-150 nm 的膜性囊泡,天然存在于体液中,包括血液、唾液、尿液和母乳。Exosome 携带了包含细胞溶质蛋白、 参与细胞内信号转导的蛋白、各种代谢酶、热休克蛋白和四跨膜蛋白及特殊蛋白质,参与细胞活动的重要调控,有望成为多种疾病的早期诊断标志物。 Exosome 在作为基因和药物运载、肿瘤肿瘤和肿瘤生物学研究方面已经成为热点。

沉淀法
      GSTM Exosome Isolation Reagent 是用于快速高效地从血清血浆、细胞培养上清、脑脊液和尿液中提取 exosome 的试剂盒,仅需通过简单混匀和常规离心即可从样本中获取大量 结构完整的exosome,比传统的超速离心法节省时间和样本。以 GSTMExosome Isolation Reagent 提取的 exosome 可根据实验目的用于后续多种实验,应用范围广泛。
 

优势
1. 操作简单,无需超速离心,省时省力;
2. 纯度高,富集量大,应用范围广;
3. 获取的 Exosome 结构和功能完整;
4. 稳定性好,便于运输,便于保存。


柱提法
     GSTM Exosome Isolation Kit(柱提式)应用了柱提式的提取分离技术,一步法分离出血浆 / 血清 / 细胞上清液中的外泌体,调节结合条件后,外泌体被吸附在柱子的膜上,而杂质不被吸附而去除。柱子经洗涤后去除杂质,最后洗脱出外泌体。得到的外泌体可用于 WB、质谱、QPCR 检测、高通量测序等实验。

优势
1. 操作简易:不需要超速离心,分离时间小于 1 小时;

2. 高得率:分离的外泌体颗粒量可媲美超速离心;
3. 分离高纯度的外泌体:外泌体纯度 >95%;
4. 分离的外泌体形态完整。

试剂盒分离的外泌体鉴定
       根据国际细胞外囊泡协会于 2014 年发表的一个指导手册(MISEV),鉴定外泌体首先需要通过 WB 来鉴定细胞外囊泡的标志蛋白是否存在于样品中,通过电子显微镜来观察样品中细胞外囊泡的形态特征,通过 NTA 等手段来分析样品中细胞外囊泡的群体特征(粒子浓度、直径分布等)。

外泌体 WB 检测(本试剂盒与 PEG 原理的试剂盒对比)

比较血清、血浆在 PEG 试剂盒及本试剂盒中 CD9 的 WB 检测

Western Blot 进行外泌体鉴定,CD9 条带清晰可见。本试剂盒提取的外泌体蛋白检测条带单一,纯度比 PEG 原理的提取试剂盒更高。

外泌体电镜检测

本试剂盒提取的血清外泌体电镜图

电镜结果显示,外泌体呈囊泡状,粒径大小约为 120 nm,与文献中报道的 30-150 nm 一致。

外泌体粒径检测

本试剂盒提取的外泌体的 NTA 检测图

Nanosight 进行粒径检测,粒径均一,平均粒径为 128 nm ,与文献报道相符。

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