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免疫球蛋白提取技术:禽IgA提取与纯化

发布时间:2018-08-29 15:54 点击次数:

(一)材料与试剂配制

1.禽胆汁
2.饱和硫酸铵溶液
3.0.01Mol/L pH7.4PBS
4.0.10Mol/L pH6.4PBS液(0.30Mol/L NaCl)
5. DEAE52-纤维素

(二)操作方法

1.取冷藏的胆汁3Ⅹml,缓慢滴加Ⅹml饱和硫酸铵液,边加边搅拌,使成25%饱和硫酸铵液。4℃放置30min。
1. 3 000r/min离心30min,去沉淀。
2. 取上清,加饱和硫酸铵液,使成35%的饱和度,4℃放置30min。
3. 3 000r/min离心30min,弃上清。
4. 取沉淀,加0.85%NaCl液溶解,加饱和硫酸铵溶液,重复步骤3和4三次。
5. 将沉淀用0.85%NaCl液溶解,装入透析袋,以0.01Mol/L pH7.4PBS液透析。
6. 以0.01Mol/L pH7.4PBS液平衡,过DEAE52纤维柱(20×250mm)。
7. 取透析样品4ml(﹥20mg/ml蛋白浓度)加入层析柱 。以0.01Mol/L pH7.4PBS液洗脱。
8. 再用0.10Mol/L pH6.4PBS液(NaCl浓度为0.30Mol/L)洗脱,收集洗脱液。
10.浓缩洗脱蛋白液至20mg/ml,分装,低温冰箱 保存。