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远慕生物:细胞传代的方法

人阅读 发布时间:2018-08-28 13:57

在细胞机制的科学研究中,我们肯定会离不开细胞培养,细胞培养中的细胞传代是非常重要的程序,这一环节不注意,细胞的生长状态不好,会严重影响细胞实验进程。所以今天小编就带大家一起去学习正确进行细胞传代,希望我的经验给大家带来帮助。

方法步骤

1.【无菌环境】

在细胞实验之前要注意无菌环境的建立,紫外杀毒灭菌,酒精消毒都是十分有必要的。

2.【镜下检查】

镜下检查结果非常重要,镜检的结果非常重要,要根据你自己的观察进行细胞密度的识别,从而进行细胞传代比例的确定,进行更好的细胞数量的控制,如果实验要求比较高,需要细胞计数板计数。

3.【过火焰】

记住,所有开瓶的东西都要进行过酒精灯外焰,瞬间高温进行灰尘的固定。这样会大大减少染菌几率。

4.【移液工具】

很多人对于移液工具都有偏好,不好说什么就是正确的。但是从无菌角度。使用移液管比微量移液枪减少污染的几率要高。希望大家能用移液管

5.【交叉污染】

混匀细胞悬液和移取培养基以及血清的工具要分开;还有就是胰酶和血清也要严格分开,否则容易造成交叉感染,使细胞增加染菌几率

6.【消化时间】

对于贴壁细胞,我想要大家注意的是胰酶消化时间,对于常用0.25%的胰酶最好把消化时间控制在30s内,必要是最好镜检看一下是否脱壁。但是这是一个经验活,要多积累经验。

7.【细胞混匀】

细胞的混匀要轻柔,气泡的产生对细胞的状态是有影响的,希望大家注意。另外,贴壁细胞容易粘连,所以要多吹打几次


细胞如何进行传代?


1.培养皿中的细胞覆盖率达到80%-90%时要传代。
2.把原有培养基吸掉。
3.加适当的胰蛋白酶(能覆盖细胞就行),消化1-2分钟。
4.细胞都变圆后加如入等体积的含血清的培养基终止消化。
5.用移液枪吹打细胞,把细胞都悬起来。
6.把细胞吸到15ml的离心管中,1000转离心5分钟。
7.倒掉上清液,加1-2ml培养基,把细胞都吹起来。
8.根据细胞种类把细胞传到几个培养皿中。继续培养。

 

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