远慕讲解:超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定实验_公司新闻

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远慕讲解:超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定实验

人阅读发布时间：2018-08-22 10:25

超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase SOD）是一种广泛存在于动植物、微生物中的金属酶。能催化生物体内超氧自由基(O2-)发生歧化反应，是机体内O2-的天然消除剂 [1] 。从而清除O2-，在生物体的自我保护系统中起着极为重要的作用。在免疫系统中也有极为重要的作用.

【实验原理】

SOD是含金属辅基的酶，它催化以下反应：

0₂ ^- +0₂ ^- + 2H⁺ H₂ 0₂ +0₂

由于超氧阴离子自由基0₂ ^- 寿命短，不稳定，不易直接测定SOD活性,而采用间接的方法。目前常用的方法有3种, 包括氮蓝四唑(NBT)光化还原法，邻苯三酚自氧化法，化学发光法。本实验主要介绍光化还原法，其原理是：氮蓝四唑在蛋氨酸和核黄素存在条件下，照光后发生光化还原反应而生成蓝色甲腙，蓝色甲腙在560nm处有最大光吸收。SOD能抑制NBT的光化还原，其抑制强度与酶活性在一定范围内成正比。

试剂:

　1.50m mol/l pH7.8的磷酸缓冲液(PBS) 。含0.1m mol/l EDTA

2.220m mol/l甲硫氨酸：称3.2824g甲硫氨酸\,用50m mol/l pH7.8的磷酸缓冲液定溶至100ml（现配现用）。

3.1.25m mol/l氯化硝基四氮唑蓝（NBT）溶液（现配）：称NBT 0.102g,用

50m mol/l pH7.8的磷酸缓冲液(PBS)溶解定容至100ml.

4.0.033m mol/l核黄素：称2.52mg 用PBS溶解定容至200ml（遮光保存）。

【实验步骤】

1．酶液制备

称取植物组织0.5g先加入2.5ml PBS，研磨匀浆后，再加入2.5ml PBS混匀，

4℃下 10000r/min离心15min 上清液即为粗酶液。取部分上清液经适当稀释后用于酶活性测定。

2.酶活性测定

取10ml小烧杯7只, 3只测定样品,4只作为对照，

按下表加入试计:

试剂	用量(ml )	终浓度(比色时)
50m mol/l (PBS) 220m mol/l Met 1.25m mol/l NBT 0.033m mol/l核黄素酶液总体积	4.05 0.3 0.3 0.3 0.05 5.0	13m mol/l 75µ mol/l 2.0µ mol/l 对照以缓冲液代替酶液