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远慕讲解:鞭毛染色法的注意事项

人阅读 发布时间:2018-08-20 16:58

1.试剂配制:

甲液:丹宁酸 5克,氯化铁(FeCl3)1.5克,福尔马林(15%)2.0毫升,氢氧化钠(NaOH)1% 1.0毫升

乙液:硝酸银(AgNO3)2克

蒸馏水 100 毫升

制备乙液时,待硝酸银溶解后,取出10毫升备用,向余下的90毫升硝酸银液中滴加浓氢氧化铵,先呈很浓厚的沉淀,再继续滴加至刚刚溶解沉淀成澄清液为止。再将备用的硝酸银溶液慢慢逐滴加入澄清液中,先呈现薄雾,但轻摇则消失,继续边滴加边摇动,待澄清液呈现略有轻微不消散的薄雾状为止。如雾重,则银盐沉淀,不宜使用。

2.染色方法:

(1)将待检菌接种在新制备的肉汤琼脂斜面上,置37°培养16—20小时,备用。

(2)在载玻片的中部相隔一厘米处,用接种环各沾一滴蒸馏水,然后用接种环挑取湿润处的菌苔少许于一端的水滴中,倾斜玻片使培养物流至另一水滴中,两水滴自然相通,菌体从上位自然扩散到下位水滴中,待干燥后染色。

(3)在干燥涂片上加甲液3—5分钟,用蒸馏水冲洗。将残水沥干或用乙液冲去残水后,加适量乙液保持30—60秒钟。染色时在酒精灯上稍加热,使染液出现蒸汽即可,用蒸馏水冲洗。

(4)镜检:菌体及鞭毛皆染成茶色。

3.注意事项:

(1)染液最好随用随配,存放至次日效果则差。

(2)一定要充分洗净甲液后再加乙液,否则背景较脏。

(3)防止水及培养物沾有氯化物。

(4)切忌用接种环涂抹培养物。

(5)载玻片一定要洗净。先用洗衣粉煮沸,再水洗,干后放在洗液中,浸泡 24 小时,取出水洗除去残酸,沥干,存放于95% 乙醇中备用。

(6)加热时最好置金属板上,使载玻片受热均匀。

β-半乳糖苷酶可以催化二糖乳糖水解为单糖:葡萄糖和半乳糖。

β-半乳糖苷酶的活性可以用 X-gal(5-溴-4-氢-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)等显色底物加以检测,β-半乳糖苷酶可将 X-gal 转变为不溶性的深蓝色沉淀。

X-gal 可以做为组织染色剂,可以在所有表达β-半乳糖苷酶的植物和动物组织上产生颜色。

应该是可以用来病毒感染组织切片染色的。

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