本试剂盒仅供研究使用。

　　检测范围：48T25ng/L-800ng/L

　　使用目的：

　　本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关本试剂盒仅供研究使用。

　　检测范围：48T25ng/L-800ng/L

　　使用目的：

　　本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本抗内因子抗体（IFA）含量。

　　实验原理

　　本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人抗内因子抗体（IFA）水平。用纯化的人抗内因子抗体（IFA）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入抗内因子抗体（IFA），再与HRP标记的抗内因子抗体（IFA）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的抗内因子抗体（IFA）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人抗内因子抗体（IFA）浓度。

　　试剂盒组成

　　1.30倍浓缩洗涤液20ml×1瓶；2.酶标试剂6ml×1瓶

　　3.酶标包被板12孔×8条；4.样品稀释液6ml×1瓶

　　5.显色剂A液6ml×1瓶；6.显色剂B液6ml×1/瓶

　　7.终止液6ml×1瓶；8.标准品（48ng/ml）0.5ml×1瓶

　　9.标准品稀释液1.5ml×1瓶；10.说明书1份

　　11.封板膜2张；12.密封袋1个

　　150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

　　2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

　　3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

　　4.配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用

　　5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

　　6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

　　7.温育：操作同3。

　　8.洗涤：操作同5。

　　9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

　　10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

　　11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

　　Elisa试剂盒组织结构：

　　1、血清：操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。

　　2、血浆：EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。

　　3、细胞上清液：1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。

　　4、组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液。

　　5、保存：如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

　　注意事项：

　　1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

　　2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

　　3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

　　4．请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。

　　5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　6．底物请避光保存。

　　7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

　　8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

　　9．本试剂不同批号组分不得混用。

　　10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

　　保存条件及有效期

　　1．试剂盒保存：；2-8℃。

　　2．有效期：6个月