植物总酚检测试剂盒(比色法)操作步骤

植物总酚检测试剂盒(比色法)产品简介:
植物组织或果实中存在花青素、叶绿素、类胡萝卜素、类黄酮、酚类等物质，这些物质与果实等样品衰老过程密切相关，对其加工性能、存储、营养价值等都有重要影响，植物酚类物质具有清除自由基，抗氧化抗衰老的作用，具有较高的营养价值和医疗保健作用而广泛应用于化妆品、食品、医药等领域。

植物总酚检测试剂盒(比色法)检测原理是总酚(Total Phenol)溶于有机溶剂，以有机溶剂粗提总酚，根据提取液的吸收光谱特性，可利用分光光度计在特定波长(280nm)处测定其吸光度，通过与标准曲线比较，计算出总酚含量，主要用于植物组织或果实中总酚的提取以及定量检测总酚含量。该试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

自备材料：
1、实验材料：桃子、李子、苹果、杏等果实或其他植物组织
2、天平、称量纸、剪刀、研钵或匀浆器、离心管、离心机、滤纸或纱布
3、石英比色杯、紫外分光光度计

操作步骤(仅供参考):
1、总酚提取：
①取果实或其他植物组织，洗净，擦干，称取剪碎的新鲜样品0.25g，置于4℃预冷的研钵或匀浆器。
②加入4℃预冷的2~3mlTPAssayBuffer，充分研磨或匀浆后转入10ml离心管，用
TPAssayBuffer冲洗研钵或匀浆器并转移至离心管，补加TPAssayBuffer至8ml。
③4℃避光静置20min，期间摇动2~3次，然后过滤至离心管中，也可用离心机8000r/min离心3min，滤液(上清液)即为总酚粗提液。
稀释总酚标准溶液:将总酚标准(1mg/ml)用TPAssayBuffer稀释成总酚标准(50ug/ml)，取干净离心管或试管，按下表进行操作，依次稀释。
加入物(ml)123456    1    2    3    4    5    6    
总酚标准(50ug/ml)     0.1    0.2    0.3    0.4    0.5    0.6    
TP Assay Buffer    0.9    0.8    0.7    0.6    0.5    0.4    
总酚标准(50ug/ml)    5    10    15    20    25    30    

3、TP加样：按照下表设置空白管、对照管、测定管；如果样品中的总酚浓度过高，可以
减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置2平行管，求平均值。
加入物(ml)    空白管    标准管    测定管    
TPAssayBuffer    1    -    -    
系列总酚标准(1~6号管)    -    1    -    
总酚粗提液    -    -    1    

注意：如用较大的比色杯，可相应增加试剂量，其后计算公式中V1=加样时所用总酚粗提液的体积(ml)应相应发生变化。
4、TP测定：各管试剂加入光径1cm的石英比色杯中，在5~15min内，以空白管调零，用紫外分光光度计280nm处测定系列标准管、测定管的吸光度。

计算：
以1~6号管系列总酚标准浓度(0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、1mg/ml)为横坐标，以对应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，进而计算出各测定管总酚含量(mg/ml)。
组织样品的总酚(mg/g)={C×VT}/(W×V1)
式中：C=根据标准曲线求得的测定管总酚含量(mg/ml)
VT=总酚粗提液总体积(ml)=8
V1=加样时所用总酚粗提液的体积(ml)=1
W=样品鲜重(g)
液体样品的总酚(mg/ml)=C×N/V
式中：C=根据标准曲线求得的测定管总酚含量(mg/ml)
V=加样时所用总酚粗提液的体积(ml)=1
N=稀释倍数

注意事项：
1、为了避免总酚见光分解，操作时应尽量避光，研磨或匀浆时应尽量缩短时间。
2、取样量、试剂用量应根据总酚含量适当调整。
3、TPAssayBuffer应密闭保存，避免有效成分挥发。
4、测定时，比色皿上应加盖，防止挥发。
5、测定应及时，时间延长，总酚浓度高时，测定结果可能偏低。
6、植物总酚浓度在10~20ug/ml范围是，OD值基本稳定，超出范围时结果有稍微变化。
7、如果没有分光光度计，也可以使用酶标仪测定。
8、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。