沙氏琼脂培养基(SDA)使用说明书

一、背景

沙氏琼脂培养基(SDA)用于黑曲霉及白念珠菌的分离培养，还用于一次性使用卫生用品真菌菌落总数检测(GB15979-2002)。原理：蛋白胨提供碳源和氮源;葡萄糖提供能源;琼脂是培养基的凝固剂;氯霉素可抑制细菌的生长。

配方(每升)：蛋白胨10g；葡萄糖40g；琼脂15g；氯霉素0.1g；最终pH 6.0±0.2

二、使用方法

1、称取本品65.1g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，115℃高压灭菌15min，备用。

2、取样液接种5个平皿，每个平皿中加入1mL，然后加入15 mL左右已溶化并保温至45℃左右的培养基，摇匀，凝固后，置25±2℃培养7d。

3、分别于3、5、7天观察结果，计算平板上的菌落数，并求平均值。

白念珠菌是一种腐物寄生菌，平时生存于人体的皮肤、粘膜、消化道及其他脏器中，当机体抵抗力降低时，白色念珠菌就会繁殖，达到一定量时，人体就会发病，所以白念珠菌是一种条件致病菌。

三、应用

用于念珠菌ERG3基因突变对抗真菌药物耐药的作用研究：

侵袭性真菌感染发病率不断上升，以念珠菌感染为主，其中白念珠菌为主。但由于预防性使用抗真菌药物，非白念珠菌尤其是对氟康唑天然耐药的克柔念珠菌感染出现上升趋势，但白念珠菌感染仍占优势。

随着白念珠菌和克柔念珠菌对唑类抗真菌药物的耐药现象越来越严重，深入研究其耐药机制迫在眉睫。

了解白念珠菌和克柔念珠菌对常用抗真菌药物的敏感性，对白念珠菌耐药菌株和敏感菌株ERG3基因扩增、测序、生物信息学分析，明确白念珠菌ERG3基因突变与抗真菌药物耐药之间的关系。

方法：收集患者无菌体液标本，使用沙氏培养基、玉米吐温80琼脂培养基、CHROMagar念珠菌显色培养基和API 20C AUX鉴定系统进行念珠菌的分离和鉴定。从中分别选取35株白念珠菌和20株克柔念珠菌进行体外药物敏感性试验，确立耐药菌株和敏感菌株。对白念珠菌ERG3基因进行PCR扩增、测序，最后应用BLAST软件进行比对分析。

结果：检出的163株真菌中，白念珠菌54.61%，非白念珠菌42.94%，霉菌2.45%。其中非白念珠菌从高到低依次为克柔念珠菌(16.57%)、光滑念珠菌(14.72%)、热带念珠菌(4.91%)、近平滑念珠菌(4.29%)和葡萄牙念珠菌(2.45%)；

Logistic多因素回归分析结果显示：性别、病程、体温、预防性使用抗真菌药物、免疫抑制剂、有创伤的检查和治疗、患者预后和地域因素是住院患者无菌体液标本中侵袭性真菌感染的独立危险因素。