紫外法蛋白定量试剂盒操作步骤

产品名称：紫外法蛋白定量试剂盒
规格：250T/500T
分类：蛋白检测
储存条件：室温,避光，12个月
用途：紫外光吸收法或呈紫外分光光度法定量检测总蛋白含量
注意事项：优点是：操作迅速、简便,不易受低浓度盐类的干扰；缺点是与标准蛋白中酪氨酸、色氨酸含量差异较大的蛋白质,准确性较差。样品中含有嘌呤、嘧啶及核酸会干扰检测结果。

简介：
蛋白质分子中存在含有共轭双键的酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸，使蛋白质在270～波长范围内具有吸收紫外光的性质，其中酪氨酸的最大吸收峰为，色氨酸的最大吸收峰为，苯丙氨酸的最大吸收峰为。在上述波长范围内，蛋白质溶液的吸收值与其浓度呈正比，可作定量测定。
紫外法蛋白定量试剂盒优点是：操作迅速、简便，不易受低浓度盐类的干扰；缺点是与标准蛋白中酪氨酸、色氨酸含量差异较大的蛋白质，准确性较差。样品中含有嘌呤、嘧啶及核酸会干扰检测结果。

自备材料：
1.分光光度计或酶标仪
2.96孔板或离心管

操作步骤：
1、用去离子水或蒸馏水稀释蛋白稀释液(10×，即为蛋白稀释工作液。取蛋白标准，加入蛋白稀释工作液，即配制成蛋白标准(1mg/ml)，-20°保存。
2、标准曲线法：取若干试管或96孔板，如下操作以分光光度法为例。光度法为例。选用石英比色皿，在280nm处以第1管作为调零点，分别检测各管吸光度，以A280为纵坐标，以蛋白质浓度为横坐标，绘制标准曲线。

取1ml待测蛋白加至3ml的蛋白稀释工作液中，混匀，分光光度计或酶标仪测定A280。根据标准曲线计算出样品的蛋白浓度。
3、Lowry-Kalckar法(又称280nm和260nm吸收差法)：对于含有核酸的蛋白质，无需制作标准曲线。以蛋白稀释工作液作为调零点，取待测蛋白加至蛋白稀释工作液中，混匀，分光光度计或酶标仪测定A280和A260。根据经验公式计算出待检测样品的蛋白浓度，如果蛋白浓度过高应用蛋白稀释工作液稀释后再行检测。
蛋白质浓度（g/L）=1.45xA280-0.74xA280
4、Waddell法(又称215nm和225nm吸收差法)：对于蛋白质含量较少的溶液，适用于该法。若取干试管或96孔板，如下操作以分光光度法为例。以蛋白稀释工作液作为调零点，取1ml蛋白标准（1mg/ml）加至蛋白稀释工作液中，混匀，分光光度计或酶标仪测定A215和A225。以215nm与225nm吸光度值之差(D=A215-A225)为纵坐标，以蛋白浓度为横坐标，绘制标准曲线，再测出未知样品的吸收差，即可由标准曲线查出未知样品的蛋白质浓度。或者不用制作标准曲线，直接按照如下经验公式计算：
蛋白质浓度（g/L）=144x（A215-A225）

注意事项：
1. 蛋白标准(BSA)粉末溶解于蛋白稀释工作液，该液中含有防腐剂，不影响后续检测，该蛋白标准液-20°保存。
2.待测蛋白溶解于什么样的稀释液中，蛋白标准也宜溶解于什么样的稀释液中，样的稀释液中，否则待测蛋白与蛋白标准中所含非蛋白成分不一致，有可能导致测定不准确。
3.如果没有分光光度计，也可以使用酶标仪测定，但应考虑根据比色皿的最小检测体积。
4.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。