甲基绿-派络宁染色液实验步骤

中文名称:甲基绿-派洛宁染色液
分类：核酸染色
规格：50ml 100ml
储存条件：4℃,避光,12个月
用途：脱氧核糖核酸(DNA)、核糖核酸(RNA)染色
注意事项：甲基绿经过提纯,染色结果为：DNA呈绿色,RNA呈红色

产品简介：
甲基绿-派洛宁染色液(Methyl Green-Pyronin Stain，MGP)甲基绿-派洛宁染色液是一种把细胞核染成绿色或蓝绿色，把细胞浆和细胞核中的核仁染成红色或红紫色的染色液。甲基绿又称双绿SF，属于碱性染料，是具有金属光泽的绿色微结晶或粉末，分子量为608.78，分子式为C27H35Cl4N3Zn。甲基绿和细胞核中的DNA结合，从而使细胞核染成绿色或蓝绿色，派洛宁可以和细胞浆或核仁中的RNA结合，从而使细胞浆和核仁染成红色或红紫色。

甲基绿-派洛宁染色液经过改良，不含甲醇，在组织或细胞染色中对细胞核进行染色，其中的甲基绿经过提纯，更容易着色。本染色液也可以和免疫荧光染色或免疫组化染色配合使用。10ml染色液可以染色20个样本。

自备材料：
1、系列乙醇、蒸馏水
2、滤纸、RNase(可选)
3、丁三醇或丙酮或正戊醇
4、4%多聚甲醛

操作步骤(仅供参考)：
(一)石蜡切片染色
1、组织入Carnoy固定液或10%中性福尔马林，固定3～5h。
2、切片5μm，常规脱蜡至水，蒸馏水稍洗。
3、入Methyl Green-Pyronin Stain，室温浸染30～60min。
4、取出切片，用滤纸稍微吸干切片周围染色液。
5、用丁三醇(也可用丙酮或正戊醇)冲洗3次，每次2～3min。
6、二甲苯透明，中性树胶封固。

(二)冰冻切片染色
1、蒸馏水冲洗2min。
2、切片入Methyl Green-Pyronin Stain，室温浸染25～50min。
3、用蒸馏水冲洗2次，此时样本呈蓝色。
4、余下步骤同石蜡切片染色。

(三)细胞染色
1、用4%多聚甲醛固定10min以上。
2、蒸馏水洗涤2min。
3、换用新鲜的蒸馏水，再洗涤2min。
4、用Methyl Green-Pyronin Stain染色5～10min。
5、显微镜下观察。

(四) 荧光染色
1、如果进行免疫荧光染色，在染色后应70％乙醇洗涤2次，每次2min。
2、95%乙醇脱水2min。
3、PBS或生理盐水或TBS等用于免疫染色或荧光染料染色的溶液浸泡5min。
4、进行免疫荧光染色或其它荧光染料的染色。

染色结果：
细胞核(DNA)  绿色或蓝绿色
细胞浆和核仁(RNA)  红色或红紫色

阴性对照：
1、取另外一张连续切片入RNase(1mg/ml)，37℃恒温箱内孵育3h，蒸馏水冲洗干净。
2、入Methyl Green-Pyronin Stain染色，余下步骤同上。RNA染色结果为阴性。

注意事项：
1、使用染色液时建议先取1~2个样品做预实验。
2、Methyl Green-Pyronin Stain染色可以根据染色结果和要求调整时间。
3、有些粘液细胞有可能被派洛宁染成红色，应注意区分。
有效期：12个月有效。