普鲁士蓝染色液(伊红法)操作步骤

中文名称：普鲁士蓝染色液(伊红法)
产品规格：2×50mL|2×100mL
用途：组织三价铁染色，含铁血黄素染色
注意事项：又称Perls染色液，或者柏林蓝反应。染色结果为：三价铁或含铁血黄素呈蓝色，其他呈红色。推荐采用该法作为含铁血黄素的主要染色法。
储存条件：室温，避光，12个月

产品概述：
含铁血黄素(Hemosiderin)是一种血红蛋白源性色素，为金黄色或棕黄色颗粒，因其含铁，且为金黄色，故称为含铁血黄素。当红细胞被巨噬细胞吞噬后，在溶酶体酶的作用下，血红蛋白被分解为不含铁的橙色血质和含铁的含铁血黄素。Perls普鲁士蓝反应(Prussian blue reaction)又称为含铁血黄素染色，即经过亚铁氰化钾和稀酸处理后可以产生蓝色，常见于吞噬细胞或间质内，其染色原理在于亚铁氰化钾溶液使三价铁离子从蛋白质中被稀盐酸分离出来，三价铁不亚铁氰化钾反应，生成一种不溶解的蓝色化合物即三价铁的亚铁氰化物。普鲁士蓝染色用于显示局部组织内的各种出血性病变，常见于吞噬细胞内，可以很好地区分含铁血黄素不其他色素。该染色液稳定性好、可以长期保存、不易产生沉淀、应用范围广，可以进行复染，该染色液的复染液采用伊红。

使用方法：
 (一)石蜡切片染色：
1、组织固定于10%中性福尔马林，常规脱水包埋。
2、切片厚度4μm，常规脱蜡至水。
3、蒸馏水水洗1min。
4、切片入Perlsstain(见注意事项2)，浸染15～30min。
5、蒸馏水充分冲洗5～10min。
6、入伊红染色液，淡染细胞核15～30s。
7、自来水冲洗1～5s。
8、常规脱水透明，中性树胶封固
(二)冰冻切片染色：
1、无需脱蜡，直接迅速用蒸馏水冲洗2～3min。
2、染色、脱蜡、透明、封固步骤同石蜡切片的染色步骤。
(三)细胞染色：
1、4%多聚甲醛固定10～20min
2、自来水冲洗2次，每次2min。
3、蒸馏水冲洗2次，每次2min。
4、染色、脱蜡、透明、封固步骤同石蜡切片的染色步骤。


染色结果：
含铁血黄素或三价铁 蓝色
细胞核、其他组织 红色

注意事项：
1、切片脱蜡应尽量干净。组织固定常采用10%中性福尔马林，经普通福尔马林长期固定后，组织会有损伤。避免使用酸性固定剂，铬酸盐处理也会妨碍铁的保存。
2、整个操作过程中容器要干净，避免用金属铁制品，洗切片和容器时以蒸馏水为宜，因普通水内含铁质。Perlsstain染色时，应根据样本情况调整着色时间。
3、所有切片都应使用同一个阳性对照切片，选择适合的对照非常重要。尸检肺组织是一个很好的对照，包含相当数量的铁阳性巨噬细胞(心衰细胞)。
4、冰冻切片和细胞染色，最好根据具体情况摸索实验条件。