细胞维甲酸结合蛋白2抗体原理

{英文名称}CRABP2

{中文名称}CRABP2抗体/细胞维甲酸结合蛋白2抗体

{规格}：0.1ml  0.2ml  

{研究领域}肿瘤  细胞生物  神经生物学  信号转导  新陈代谢  

{抗体来源}Rabbit

{克隆类型}Polyclonal

{交叉反应}Human, Mouse, Rat, Pig, Horse,

{产品应用}WB=1:100-500 ELISA=1:500-1000 IP=1:20-100 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 ICC=1:100-500 IF=1:100-500 （石蜡切片需做抗原修复）

not yet tested in other applications.

optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.

｛分 子 量｝50kDa

｛性    状｝Lyophilized or Liquid

｛浓    度｝1mg/1ml

｛免 疫 原｝KLH conjugated synthetic peptide derived from human ALDH3A1

｛亚    型｝IgG

｛纯化方法｝affinity purified by Protein A

｛储 存 液｝Preservative: 15mM Sodium Azide, Constituents: 1% BSA, 0.01M PBS, pH 7.4

｛保存条件｝Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20°C. When reconstituted in sterile pH 7.4 0.01M PBS or diluent of antibody the antibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C.

PubMedPubMed

免疫荧光技术CRABP2抗体/细胞维甲酸结合蛋白2抗体的实验步骤

1. 直接免疫荧光法测抗原

⑴基本原理

将荧光素标记在相应的抗体上，直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高，非特异性荧光染色少。缺点是敏感性偏低；而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。此法常用于细菌、病毒等微生物的快速检查和肾炎活检、皮肤活检的免疫病理检查。

⑵试剂与仪器

磷酸盐缓冲盐水（PBS）：0.01mol/L，pH7.4

荧光标记的抗体溶液：以0.01mol/L，pH7.4的PBS进行稀释

缓冲甘油：分析纯无荧光的甘油9份+ pH9.2 0.2M碳酸盐缓冲液1份配制

搪瓷桶三只（内有0.01mol/L，pH7.4的PBS 1500ml）

有盖搪瓷盒一只（内铺一层浸湿的纱布垫）

荧光显微镜

玻片架

滤纸

37℃温箱等。

⑶实验步骤

① 滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待检标本片上，10min后弃去，使标本保持一定湿度。

② 滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液，使其完全覆盖标本，置于有盖搪瓷盒内，保温一定时间（参考：30min）。

③ 取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS冲洗后，再按顺序过0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸3-5 min，不时振荡。

④ 取出玻片，用滤纸吸去多余水分，但不使标本干燥，加一滴缓冲甘油，以盖玻片覆盖。

⑤ 立即用荧光显微镜观察。观察标本的特异性荧光强度，一般可用“+”表示：

（-）无荧光；（±）极弱的可疑荧光；（+）荧光较弱，但清楚可见；（++）荧光明亮；（+++ --++++）荧光闪亮。待检标本特异性荧光染色强度达“++”以上，而各种对照显示为（±）或（-），即可判定为阳性。

⑷注意事项

1）对荧光标记的抗体的稀释，要保证抗体的蛋白有一定的浓度，一般稀释度不应超过1：20，抗体浓度过低，会导致产生的荧光过弱，影响结果的观察。

2）染色的温度和时间需要根据各种不同的标本及抗原而变化，染色时间可以从10 min到数小时，一般30 min已足够。染色温度多采用室温（25℃左右），高于37℃可加强染色效果，但对不耐热的抗原（如流行性乙型脑炎病毒）可采用0-2℃的低温，延长染色时间。低温染色较37℃30 min效-果好的多。

3）为了保证荧光染色的正确性，首次试验时需设置下述对照，以排除某些非特异性荧光染色的干扰。

① 标本自发荧光对照：标本加1-2滴0.01mol/L，pH7.4的PBS。

② 特异性对照（抑制试验）：标本加未标记的特异性抗体，再加荧光标记的特异性抗体。

③ 阳性对照：已知的阳性标本加荧光标记的特异性抗体。

如果标本自发荧光对照和特异性对照呈无荧光或弱荧光，阳性对照和待检标本呈强荧光，则为特异性阳性染色。

4）一般标本在高压汞灯下照射超过3min，就有荧光减弱现象，经荧光染色的标本最-好在当天观察，随着时间的延长，荧光强度会逐渐下降。