琼脂糖凝胶4B操作步骤

　　产品名称：琼脂糖凝胶4B

　　英文名称：ECH Sepharose 4B

　　外观（性状）：颗粒单位：瓶

　　羧基-琼脂糖凝胶4B：分离试剂，层析介质。

　　产品简介

　　羧基-琼脂糖凝胶4B是用由环氧树脂耦合方法将6-氨基已酸共价键偶联到琼脂糖4B上。羧基-琼脂糖凝胶4B含有一个10个碳原子连接臂自由羧基，耦合氨基基团的配体。长长的间隔臂使它特别适合固定的小分子。

　　产品参数

　　产品名称：羧基-琼脂糖凝胶4B (ECH Sepharose 4B)

　　货号：S9410

　　基质：4%琼脂糖凝胶

　　耦合基团：氨基

　　颗粒大小：90μm

　　最大流速：75cm/h

　　工作pH：3-14

　　操作温度：室温

　　保存条件：贮存于4°C-8°C（保存溶液为20%乙醇）

　　使用方法

　　1.乙醇浸泡：在室温下，将干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小时，并不断搅拌以保证凝胶溶胀，用无盐水洗去残存的乙醇滤干;

　　2.无盐水浸泡：室温下，在无盐水中充分溶胀24小时，间隙搅拌，以保证凝胶的完全溶胀，然后；

　　3.盐酸浸泡：在常温下再用0.2NHCl浸泡12小时，间隙搅拌，滤干，水洗只中性；

　　4.将溶胀好的凝胶脱气后（真空抽滤或超声波）根据装柱要求一次性置入柱内，注意保持湿态装柱，并避免柱内产生气泡或断层；

　　5.上样前平衡层析柱至少3-5个柱体积直到记录仪基线变得平稳为止（流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值）；

　　6.凝胶过滤的上样量一般为5%的柱床体积，我们建议初次上样控制在1-2%的床体积，视分离情况可以调整；脱盐时上样量可以达到20%的柱床体积，柱高的选择也与分离要求相关，柱高控制在40-50cm以下，过高的凝胶层会引起较大的反压，应当尽可能避免。难分离物质要有定柱高和流速控制，脱盐时高径比为5：1即可；

　　7.洗脱方法：可以用无盐水，也可以采用上柱时的缓冲液洗脱；在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脱或盐梯度洗脱也可以完全分离纯化；

　　8.在位清洗（CIP）凝胶使用十次后作一次CIP，目的是去除柱床内沉淀的及顽固残留的蛋白。方法是以40cm/h用1M氢氧化钠反向洗四个柱体积，再以至少三个柱体积平衡缓冲液再生。