PEG3350溶液(50%,无菌)操作步骤

产品名称：PEG3350溶液(50%,无菌)
规格：10ml/100ml/500ml
分类：细胞培养
储存条件：室温,12个月
用途：聚乙二醇诱导细胞融合，可用作融合剂,以获得生产单克隆抗体的杂交瘤细胞,诱导细胞杂交。也可用于酵母转化。
注意事项：无菌溶液,由DPBS(pH7.4)和PEG33500或称聚乙二醇3350组成,经无菌处理。体外培养的单层贴壁细胞或悬浮细胞均可以做融合，但成功概率较大的是单层贴壁细胞。
酵母感受态细胞的制备：
1.活化菌种。-80℃保存的菌种在固体YPDA培养基（YPDA加20g Agar/L）上划线，在30℃培养2-4天。
2.挑取酵母单菌落在固体YPDA培养基上划3-5 mm的短线，在30 ℃培养2-4天。待酵母单菌落长至2 mm长时，接种。
3.首先把酵母细胞接种到3 ml液体YPDA培养基中，30℃过夜培养。
4.第二天转接到含有30 ml液体YPDA培养基的三角瓶中继续培养，待OD600到0.4-0.5范围内。收集细胞，1000 g，离心5 min, 去上清。
5.沉淀用30-50 ml的无菌的去离子水悬浮。1000 g，离心5 min，去上清。
6.沉淀用合适体积的100 mM LiAc悬浮（30 ml的酵母菌最多用不超过1 ml的100 mM LiAc悬浮，通常100 μl的酵母细胞用于转化一个质粒，即一个反应）。
7.把酵母细胞的悬浮液分装到1.5 ml的离心管中，每管分装100 μl，用于转化一个质粒即一个反应。1000 g，离心5 min，去上清。制备好的感受态细胞备用。

酵母转化：
1.配制预混液，每转化一个质粒即一个反应需要360 μl的预混液。
50% PEG    240 μl    
1 M LiAc    36 μl    
Carrier DNA（10 mg/ml）    5 μl    
质粒（大约200 ng/μl）    5 μl（根据质粒的浓度加入相应的体积）    
总体积    360 μl    

2.吸取360 μl的预混液加入到感受态细胞中，用枪头反复吹吸沉淀，使离心管底的酵母细胞彻底地悬浮在含有PEG的预混液中。
3.放置在30 ℃的水浴锅中孵育30 min，每10 min混匀一次。
4.放置在42 ℃的水浴锅中热击30 min，每10 min混匀一次。
5.12000 rpm，离心1 min，去掉上清液。
6.沉淀中加入100 μl的无菌的去离子水，悬浮沉淀。
7.把酵母细胞涂到相应的酵母培养基平板上，30℃培养2-4天。


注意事项：
1. 初次使用Carrier DNA，请把装有Carrier DNA的管子在沸水中煮沸5 min，然后立即放在冰上，用后放在-20℃储存备用。下次使用时请在冰上解冻Carrier DNA。
2. PEG溶液在低温环境下会析出，请于常温环境下完全溶解后使用。
3. 转化全程要无菌操作。


注意事项
1．避免接触眼睛、呼吸系统、皮肤；若误接触眼睛，立即用水冲洗或向医生咨询；
2．由于组织或细胞性质不同，实验人员应依据具体情况，确定**消化时间；消化细胞时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁和生长状况；
3．本产品不含抑菌剂，在使用过程中要特别注意无菌操作，避免消化液被微生物污染，大包装，建议无菌分装保存；
4.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。