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细胞培养出现问题了怎么办

发布时间:2018-08-07 13:37 点击次数:

细胞培养过程中会出现一些问题,比如:细胞无法在培养皿上贴壁生长,细胞生长缓慢,细胞死亡等。那么该如何解决呢?
一、细胞无法在培养器皿上贴壁生长
1.细胞胰酶消化过度:缩短胰酶消化时间或减少胰酶用量。
2.支原体污染:隔离细胞,检测是否感染支原体;清洗通风厨和培养箱,如细胞被污染,灭菌处理后丢弃。
3.培养基中无附着因子:如果使用的是无血清配方,应确保含有附着因子或者使用经过包被的培养板。
二、细胞生长缓慢
1.培养基或血清改变:比较不同培养基配方中葡萄糖、氨基酸及其他成分有无差异;通过生长实验比较新老批次血清有无差异;增大细胞初始接种密度;使细胞逐步适应新的培养基。
2.必需生长促进成分(如L-谷氨酰胺或生长因子)耗竭、缺乏或分解:去除原培养基,加入新鲜培养基;向培养基中添加生长促进成分(如L-谷氨酰胺)。
3.轻度细菌或真菌污染:在不添加抗生素的条件下进行培养,如细胞被污染,灭菌处理后丢弃。
4.时间存储不当:血清应于-5℃至-20℃下储存;培养基应于2℃~8℃下避光储存;尽量减少血清和培养基见光时间。
5.细胞初始接种密度低:增大活细胞接种密度。
6.细胞衰老、老化:将老化细胞丢弃,取用代数较少的细胞。
7.支原体污染:隔离细胞,检测是否感染支原体;清洗通风厨和培养箱,如细胞被污染,灭菌处理后丢弃。
三、培养基pH值变化迅速
1.培养箱CO2分压设置错误:根据培养基中NaHCO3的浓度增大或降低培养箱CO2的分压,NaHCO3浓度为2.0-3.7g/L时,应相应地使用5%-10%的CO2分压。
2.细胞培养瓶瓶盖过紧:将瓶盖旋松1/4圈。
3.碳酸氢盐缓存系统缓冲能力不足:加入HEPES缓冲液,使其终浓度为10-25mM。
4.培养基中盐含量不正确:CO2平衡环境中使用以Earle平衡盐为基础的培养基,大气条件下使用以Hanks平衡盐为基础的培养基。
5.细菌、酵母或真菌污染:将细胞和培养基灭菌处理后丢弃。
四、细胞凋亡
1.培养箱中无CO2:监测培养箱中CO2使用速度以便确定及时更换气瓶;经常检测管路连接处是否漏气;不要频繁开启培养箱门。
2.培养箱内温度有波动:监测培养箱内温度,及时校正。
3.使用抗生素达到毒性浓度:减少抗生素的用量;使用无血清培养基时,抗生素浓度应降低至1/10。
4.细胞复苏或冻存时受到损伤:取用新的细胞。
5.培养基的渗透压不合适:检查完全培养基的渗透压。大多数哺乳动物细胞可耐受260~350mOsm/kg的渗透压,加入某些试剂和药物后会影响培养基的渗透压;昆虫细胞培养基的渗透压(340~380mOsm/kg)要高于哺乳动物细胞。
6.培养基中毒性代谢产物蓄积:去除原培养基,换用新鲜培养基。
五、悬浮细胞集成团
1.存在钙离子和镁离子:用不含钙离子和镁离子的平衡盐溶液清洗细胞,轻轻吹打细胞,使其形成单细胞悬液。
2.支原体污染:隔离细胞,检测是否感染支原体;清洗通风厨和培养箱,如细胞被污染,灭菌处理后丢弃。
3.蛋白水解酶消化过度导致细胞裂解、DNA释放:用0.001%DNA酶I处理细胞;用PBS冲洗后再接种到新培养基中。