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人多巴胺(DA)ELISA试剂盒说明书

人阅读 发布时间:2018-07-17 10:34

人多巴胺(DA)ELISA试剂盒说明书

 
 
【中文名称】:人多巴胺(DA)ELISA试剂盒
【英文名称】:humandopamine,DAELISAKit
【产品规格】:96T/48T。
【保存条件】:2-8℃低温保存
【保质期】:6个,所有试剂盒均提供最新批次。
【试剂盒成分】:酶标板,试剂,标准品等。ELISA试剂盒检测范围:人、绵羊、小鼠、大鼠、猪、兔、山羊、牛、马、猪、其它动物细胞因子、植物细胞因子、骨代谢、细胞凋亡、激素内分泌、活性多肽、肝纤维化、自身抗体、血栓与止血、肿瘤、自身抗体科研Elisa检测试剂盒。   主要用于科研方面,不用于临床诊断。可以用于检测各种指标。

使用目的:
本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中多巴胺(DA)含量。

实验原理
本试剂盒应用间接法测定标本中人多巴胺(DA)水平。用纯化的人多巴胺(DA)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入已知浓度的多巴胺(DA)标准品和未知浓度的多巴胺(DA)待检样品,温育后,加入生物素标记的抗IgG抗体,再与链霉亲和素-HRP结合,形成免疫复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的多巴胺(DA)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人多巴胺(DA)浓度。

试剂盒组成
 
1 20倍浓缩洗涤液 50ml×1瓶  
 
9
标准品S1(900ng/L) 0.5ml×1瓶
2 链霉亲和素-HRP 6ml×1瓶 标准品S2(600ng/L) 0.5ml×1瓶
3 酶标包被板 12孔×8条 标准品S3(300ng/L) 0.5ml×1瓶
4 生物素标记的抗-IgG抗体 6ml×1瓶 标准品S4(150ng/L) 0.5ml×1瓶
5 显色剂A液 6ml×1瓶 标准品S5(75ng/L ) 0.5ml×1瓶 
6 显色剂B液 6ml×1/瓶 10 密封袋 1个
7 终止液 6ml×1瓶 11 封板膜 3张
8 样品稀释液 6ml×1瓶 12 说明书 1份
 
标本要求
1.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
2.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

操作步骤
  1. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。
  2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品,生物素标记的抗-IgG抗体,链霉亲和素-HRP,其余各步操作相同)、标准品孔、待测样品孔。然后在标准品孔中加入标准品50μl,在样本反应孔中先加入待测样品10μl再加入样品稀释液40μl(样品最终稀释度为5倍),盖上封板膜,轻轻振荡混匀,37℃温育45分钟。
  3. 配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
  4. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复4次,拍干。
  5. 加生物素标记的抗-IgG抗体:每孔加入生物素标记的抗-IgG抗体50μl(空白孔除外)。37℃温育30分钟
  6. 洗涤:操作同4。
  7. 加链霉亲和素-HRP:每孔加入50μl的链酶亲和素-HRP(空白孔除外),轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
  8. 洗涤:操作同4。
  9. 显色:每孔先加入显色剂A 50μl,再加入显色剂B 50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
  10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
  11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
  12. 计算
  13.   以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值待入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
注意事项:
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4.如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先将样本稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以稀释倍数(×5×n)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.本试剂不同批号组分不得混用。显色剂B请避光保存。
7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。

检测范围:
0.5 ng/ml-100 ng/ml

灵敏度:
0.25 ng/ml

规格:
96人份/盒

保存条件及有效期
1.试剂盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6个月
 
 

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