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上海远慕生物科技有限公司
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试剂、抗体、细胞库 / 细胞培养、ELISA 试剂盒、技术服务、耗材、书籍 / 软件、论文服务、原辅料包材、医疗器械、体外诊断
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人多巴胺(DA)ELISA试剂盒说明书
人阅读 发布时间:2018-07-17 10:34
人多巴胺(DA)ELISA试剂盒说明书
【中文名称】:人多巴胺(DA)ELISA试剂盒
【英文名称】:humandopamine,DAELISAKit
【产品规格】:96T/48T。
【保存条件】:2-8℃低温保存
【保质期】:6个,所有试剂盒均提供最新批次。
【试剂盒成分】:酶标板,试剂,标准品等。ELISA试剂盒检测范围:人、绵羊、小鼠、大鼠、猪、兔、山羊、牛、马、猪、其它动物细胞因子、植物细胞因子、骨代谢、细胞凋亡、激素内分泌、活性多肽、肝纤维化、自身抗体、血栓与止血、肿瘤、自身抗体科研Elisa检测试剂盒。 主要用于科研方面,不用于临床诊断。可以用于检测各种指标。
使用目的:
本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中多巴胺(DA)含量。
实验原理
本试剂盒应用间接法测定标本中人多巴胺(DA)水平。用纯化的人多巴胺(DA)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入已知浓度的多巴胺(DA)标准品和未知浓度的多巴胺(DA)待检样品,温育后,加入生物素标记的抗IgG抗体,再与链霉亲和素-HRP结合,形成免疫复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的多巴胺(DA)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人多巴胺(DA)浓度。
试剂盒组成
1 | 20倍浓缩洗涤液 | 50ml×1瓶 | 9 |
标准品S1(900ng/L) | 0.5ml×1瓶 |
2 | 链霉亲和素-HRP | 6ml×1瓶 | 标准品S2(600ng/L) | 0.5ml×1瓶 | |
3 | 酶标包被板 | 12孔×8条 | 标准品S3(300ng/L) | 0.5ml×1瓶 | |
4 | 生物素标记的抗-IgG抗体 | 6ml×1瓶 | 标准品S4(150ng/L) | 0.5ml×1瓶 | |
5 | 显色剂A液 | 6ml×1瓶 | 标准品S5(75ng/L ) | 0.5ml×1瓶 | |
6 | 显色剂B液 | 6ml×1/瓶 | 10 | 密封袋 | 1个 |
7 | 终止液 | 6ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 3张 |
8 | 样品稀释液 | 6ml×1瓶 | 12 | 说明书 | 1份 |
标本要求
1.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
2.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
操作步骤
- 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。
- 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品,生物素标记的抗-IgG抗体,链霉亲和素-HRP,其余各步操作相同)、标准品孔、待测样品孔。然后在标准品孔中加入标准品50μl,在样本反应孔中先加入待测样品10μl再加入样品稀释液40μl(样品最终稀释度为5倍),盖上封板膜,轻轻振荡混匀,37℃温育45分钟。
- 配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
- 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复4次,拍干。
- 加生物素标记的抗-IgG抗体:每孔加入生物素标记的抗-IgG抗体50μl(空白孔除外)。37℃温育30分钟
- 洗涤:操作同4。
- 加链霉亲和素-HRP:每孔加入50μl的链酶亲和素-HRP(空白孔除外),轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
- 洗涤:操作同4。
- 显色:每孔先加入显色剂A 50μl,再加入显色剂B 50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
- 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
- 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
- 计算
- 以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值待入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4.如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先将样本稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以稀释倍数(×5×n)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.本试剂不同批号组分不得混用。显色剂B请避光保存。
7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。
检测范围:
0.5 ng/ml-100 ng/ml
灵敏度:
0.25 ng/ml
规格:
96人份/盒
保存条件及有效期
1.试剂盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6个月