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    内江市某公司通过丁香通成功订购远慕KIM-1蛋白和人L-FABP蛋白     ELISA的样本实验准备

    在收集样本前都必须有一个完整的计划，必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天就进行检测的样本，及时储存在4℃备用。对于隔天再检测的样本，及时分装后冻存在-20℃备用，有条件的，最好-71℃冻存备用。标本反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

    8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。 在加终止液后15分钟以内进行检测。

    注：

    1. 用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。

    2. 每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是最后加底物溶液及2N H2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。

    3. 为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜。

    4. 未使用完的酶标板或者试剂，请于2-8℃保存。标准品、生物素标记抗体工作液、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素标记抗体工作液或、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液。

    5. 建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。

    洗板方法

    手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。

    自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。

    计算

    以标准物的浓度为横坐标（对数坐标），OD值为纵坐标（普通坐标），在半对数坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

    注意事项

    1. 当混合蛋白溶液时应尽量轻缓，避免起泡。

    2. 洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。

    3. 一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

    4. 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。

    5. 如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请最后乘以稀释倍数。

    6. 在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。

    7. 底物请避光保存。

    8. 不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。

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