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Masson 三色染色试剂盒说明书

人阅读 发布时间:2016-08-12 15:17

Masson 三色染色试剂盒说明书

     Masson 三色染色是结缔组织染色知更鸟最经典的一种方法,是显示组织中纤维的主要方法之一,是胶原纤维染色权威而经典的技术方法。该法染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关:分子的大小由分子量来体现,小分子量容易穿透结构致密、渗透性低的组织;而大分子量则只能进入结构稀松的、渗透性高的组织。然而,淡绿或苯胺蓝的分子量很大,因此Masson染色后肌纤维呈红色,胶原纤维呈绿色或蓝色,主要用于区分胶原纤维和肌纤维。
     Masson试剂盒的特点:◆染色稳定;◆分化时间短,1-2分钟;◆色彩清楚鲜艳;◆使用范围广,适宜于组织的石蜡切片、冰冻切片等染色;◆所染切片保存时间长且不易褪色。
产品组成:
试剂(A-1)   苏木素染色液         25ml
试剂(A-2)   三氯化铁水溶液       25ml
试剂(B)    盐酸乙醇分化液        50ml
试剂(C)    氨水水溶液            50ml
试剂(D)    丽春红酸性品红染色液 50ml
试剂(E)    乙酸水溶液            50ml
试剂(F)    磷钼酸水溶液          50ml
试剂(G)   苯胺蓝染色液           50ml
注:临用时取A1、A2等量混合,成为试剂A,不可预先配制后放置,因染色液的色素根与铁会化合。形成不容性沉淀,等量混合后,一般24小时后失去人力。

主要成分:
试剂(A):主要由苏木素和三氯化铁组成。
试剂(B):主要由乙醇和盐酸水溶液组成。
试剂(C):主要由稀氨水水溶液组成。
试剂(D):主要由丽春红和酸性品红组成。
试剂(E):主要由乙酸水溶液组成。
试剂(F):主要由磷钼酸水溶液组成。
试剂(G):主要由苯胺蓝和弱酸组成。

操作步骤:
固定液应选用甲醛盐溶液、中性福尔马林试剂(10%,NBF)进行固定。
1、 切片脱蜡至水。
2、 试剂(A)染色5min-10min。
3、 试剂(B)分化、水洗。
4、 试剂(C)返蓝、水洗。
5、 蒸馏水或者去离子水洗1min。
6、 试剂(D)染色5-10min。
7、 试剂(E)洗1min。
8、 试剂(F)洗1-2min
9、 试剂(E)洗1min。
10、直接放入试剂(G)中染色1-2min。
11、试剂(E)洗1min。
12、95%乙醇快速脱水。
13、无水乙醇(1)5-10秒。
14、无水乙醇(2)5-10秒。
15、无水乙醇(3)5-10秒。
16、二甲苯(1)1-2分。
17、二甲苯(2)1-2分。
18、二甲苯(3)1-2分。
19、中性树胶封固。

染色结果:细胞核呈蓝色、胞浆、肌肉、红细胞呈红色,胶原纤维/蛋白呈蓝色。
注意事项:
1、 切片脱蜡应尽量干净。
2、 组织固定起着非常重要的作用,使用不同的固定液或缩短染色时间
3、 经典masson三色染色中,常要求使用试剂A染核,也可用Harris 苏木精染核,但Harris 苏木精染核后切片颜色不够鲜艳,因为色目的主要在于区分胶原纤维和肌纤维,一般也可以省略该染色步骤。
4、 试剂B的分化时间应该依据切片厚薄、组织的类别和新旧而定。
5、 试剂E为0.2%乙酸水溶液,可使色彩更清楚鲜艳、如果使用量大可自行配制。
6、 用试剂F分化要在镜下控制,分化到胶原纤维呈淡红色。纤维呈红色即可。分化时间根据染色深浅而定。一般1-2min。
7、 返蓝液常使用氨水水溶液,亦可自行配制Scoot 促蓝液或0.1-1%碳酸锂水溶液。
8、 戴一次性手套操作。
9、 使用场所应通风,并远离火源。
储存条件:
   2-25℃ 避光 

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