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ELISA试剂盒组织细胞内抗原的固定
人阅读 发布时间:2015-07-21 10:13
ELISA试剂盒组织细胞内抗原的固定
ELISA试剂盒对于植物病毒材料的固定,丙酮用得最多,乙醇次之。因为丙酮对病毒的抗原性损害为最小,但对于那些不稳定的病毒,则应避免固定。
在应用免疫酶技术时,固定处理对酶的活性的影响也得心中有数。许多固定剂对抗原的活性都 会有所损害,例如,福尔马林对蛋白抗原的固定造成抗原性的破坏非常明显。因此,对福尔马林的使用必须严格控制浓度,一般使用的福尔马林浓度为10%,尽管 如此,对抗原的抗原性还是有损害,所以必须进行抗原修复。
ELISA试剂盒另外,对于碱性磷酸酶,在4℃下,丙酮固定一昼夜,能丧失30%的活性,如用丙酮固定后包埋,则丧失70%的活性;在4℃下,福尔马林固定2-4h,则丧失25%的活性。
固定条件对标本的固定效果作用较大。
固定剂浓度:丙酮最常用的是100%;乙醇最常用95%,但是70%乙醇的固定力为最强;福尔马林常用10%。
固定的温度:一般而言,固定作用随温度升高而加强,ELISA试剂盒室温是最常用的。固定温度可以-70-30℃。应根据不同的抗原使用不同的温度,麻疹病毒应在-20-40℃用丙酮固定30min,而酶可以37℃用乙醇固定15min.
固定液的pH:一般以所用固定剂的pH为准,但若以酶去除某些抗原表面的蛋白衣膜时,应根据所用酶的性质调节pH。