上海远慕生物科技有限公司
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王宇豪
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上海 嘉定区
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试剂、抗体、细胞库 / 细胞培养、ELISA 试剂盒、技术服务、耗材、书籍 / 软件、论文服务、原辅料包材、医疗器械、体外诊断
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125I标记单克隆抗体技术
人阅读 发布时间:2015-03-26 15:51
(一) 原理
氯胺桾即对甲苯碘氯胺钠,在水溶液中生成次氯酸,为一种温和氧化剂,当加入到有蛋白质和碘的弱碱水溶液中,可将I2氧化为I+并结合到氨基酸上。如标记条件温和,标记后的McAb仍具有良好的结合活性,通过放射性同位素强度的测定可反映相应抗原的含量。
(二) 方法
在细胞冻存管内加入纯化的McAb100μg/100μl,
再加入10μl 0.05M磷酸缓冲液
再加入10μl(含1mCi)125I
↓
加入10μl氯胺-T(5mg/ml溶于0.05M
磷酸盐缓冲液),孵育时间不超过30秒
↓
加入100μl偏重亚硫酸钠(1.2mg/ml溶于
0.05M磷酸缓冲液)
↓
加入200μl KI溶液(少许结晶KI溶于0.05M
磷酸缓冲液+4%牛血清白蛋白)
↓
用PD10柱(Sephadex G25)除去游离125I
用4%BSA PBS洗脱
↓
分部收集,0.5ml/管
每管取5μl进行γ计数,计算标记抗体的比活性和标记率
结合于McAb125I放射性强度(cpm)
标记率(%)=───────────────────
总放射性强度(cpm)
结合于某一管McAb上的放射性强度
比活性(μCi/μgMcAb)=────────────────
某一管McAb总量
(三) 试剂器材
1. 纯化后的McAb
2. 0.05M磷酸缓冲液,氯胺桾,偏重亚硫酸钠,KI,BSA
3. 125I
4. 有通风装置的超净台,γ计数仪
5. PD10柱(Sephadex G25)
(四) 注意事项
1. 严防同位素污染,工作人员必须穿着工作衣,戴口罩、帽子、手套。必须在严密的通风橱或通风超净台中操作。操作前后对实验室环境进行监测。所用125I和标记物应妥善保管。
2. 如标记细胞因子、激素等,应选用更温和的标记方法,使保持更好的生物学活性。